從組織到單細(xì)胞:杜恩斯勻漿器的精細(xì)化應(yīng)用指南
更新時間:2025-12-25 點(diǎn)擊次數(shù):470次
杜恩斯勻漿器憑借其溫和的機(jī)械破碎原理,成為細(xì)胞器分離、核酸提取等實(shí)驗(yàn)的核心工具。其由磨砂玻璃管與配套研磨杵組成,通過手動推拉旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生剪切力,實(shí)現(xiàn)組織或細(xì)胞的精準(zhǔn)破碎。杜恩斯勻漿器尤其適用于肝臟、腦組織等軟質(zhì)樣本,以及培養(yǎng)細(xì)胞的勻漿處理,能有效保留細(xì)胞核、線粒體等亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性。

一、操作流程:四步實(shí)現(xiàn)高效勻漿
1.樣本預(yù)處理:將新鮮組織(如小鼠肝臟)切成1-3mm3小塊,或直接取培養(yǎng)細(xì)胞沉淀,置于冰上預(yù)冷。例如,在RNA提取實(shí)驗(yàn)中,需立即用冰冷PBS清洗組織以抑制RNase活性。
2.勻漿器準(zhǔn)備:選擇與樣本量匹配的規(guī)格(如10ml或30ml玻璃勻漿器),安裝配套的“松型”研磨杵。部分實(shí)驗(yàn)需預(yù)裝裂解液(如CER I試劑),體積通常為樣本重量的5-10倍。
3.勻漿操作:將樣本轉(zhuǎn)移至玻璃管中,手動勻速推拉研磨杵20-30次。例如,在果蠅頭部核蛋白提取實(shí)驗(yàn)中,需在冰上勻漿至溶液均一,避免局部過熱導(dǎo)致蛋白變性。
4.離心分離:將勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管,4℃條件下以2000-16000g離心5-10分鐘,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求分離上清(細(xì)胞質(zhì)提取物)或沉淀(細(xì)胞核/線粒體)。
二、關(guān)鍵優(yōu)勢與注意事項(xiàng)
該設(shè)備通過可調(diào)節(jié)的研磨力度實(shí)現(xiàn)“溫和破碎”,避免高速離心或超聲處理導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)損傷。例如,在痘苗病毒純化實(shí)驗(yàn)中,杜恩斯勻漿器與蔗糖梯度離心結(jié)合,可高效分離病毒顆粒與細(xì)胞碎片。但需注意:操作全程需冰浴以維持低溫環(huán)境;研磨杵需定期更換以防止交叉污染;硬質(zhì)組織需先用碎肉機(jī)預(yù)處理。